Проба кумбса

Факты

• предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
• порог чувствительности — не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
• число антител запускающих гемолиз — индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
• динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

Проба Кумбса
was last modified: Март 16th, 2018
by Мария Бодян

Реакцию
агглютинации для определения антирезусных
антител (непрямую реакцию Кумбса)
применяют

у больных при внутрисосудистом гемолизе.
У некоторых таких боль­ных обнаруживают
антирезусные антитела, которые являются
неполными, одновалент­ными. Они
специфически взаимодействуют с
резус-положительными эритроцитами, но
не вызывают их агглютинации. Наличие
таких неполных антител определяют в
непрямой реакции Кумбса. Для этого в
систему антирезусные антитела +
резус-положительные эритроциты добавляют
антиглобулиновую сыворотку (антитела
против иммуноглобули­нов человека),
что вызывает агглютинацию эритроцитов.
С помощью реакции Кумбса диагностируют
патологические состо­яния, связанные
с внутрисосудистым лизисом эритроцитов
иммунного генеза, например ге­молитическую
болезнь новорожденных: эрит­роциты
резус-положительного плода соединя­ются
с циркулирующими в крови неполными
антителами к резус-фактору, которые
пере­шли через плаценту от
резус-отрицательной матери.

Механизм
.
Сложность выявления неполных
(моновалентных) антител связана с тем,
что эти антитела, связываясь с эпитопами
специфического антигена, не образуют
структуру решетки и реакция между
антигенами и антителами не выявляется
ни агглютина­цией, ни преципитацией,
ни другими тестами. Для выявления
образовавшихся комплексов антиген —
антитело приходится ис­пользовать
дополнительные тест-системы. Для
выявления непол­ных антител, например
к резус-антигену эритроцитов в сыворот­ке
крови беременной женщины, реакция
ставится в два этапа: 1) к двукратным
разведениям испытуемой сыворотки
добавляют эритроциты, содержащие
резус-антиген, и выдерживают при 37 °С в
течение часа; 2) к тщательно отмытым
после первого этапа эритроцитам добавляют
кроличью античеловеческую анти-глобулиновую
сыворотку (в заранее оттитрованном
рабочем раз­ведении). После инкубации
в течение 30 мин при 37 °С резуль­таты
оценивают по наличию гемагглютинации
(положительная реакция). Необходимо
ставить контроль ингредиентов реакции:
1) антиглобулиновая сыворотка + заведомо
сенсибилизирован­ные специфическими
антителами эритроциты; 2) обработанные
нормальной сывороткой эритроциты +
антиглобулиновая сыво­ротка; 3)
обработанные исследуемой сывороткой
резус-отрица­тельные эритроциты +
антиглобулиновая сыворотка.

Расшифровка

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие — расположение антител — в крови или уже на эритроците.

• если прямая проба Кумбса отрицательна – значит на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов следует искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
• если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней — 3 месяца)
• положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании длится месяцы и даже годы

Показания

Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии , посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного , гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.

С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.

Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина , билирубина и ретикулоцитов нормализуются.

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная)
– классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), которые присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу.

Первые симптомы обусловлены как разрушением эритроцитов, так и уменьшением гемоглобина. Среди них:

• усталость, общая слабость, раздражительность
• одышка
• боль в животе и груди, тошнота
• темный цвет мочи
• боли в спине
• желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
• снижение количества эритроцитов и в

Положительный результат прямой пробы Кумбса
на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат — не дает возможности снять диагноз.

Вторичная гемолитическая анемия

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

• синдром Эванса
• инфицирование пневмонии

Положительный антиглобулиновый тест при данных заболеваниях является одним из симптомов, а не критерием диагноза.

3.Типы антиглобулиновой пробы

Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.

Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.

Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.

Система AB0

В системе AB0 антигены (аглютиноген) А и В расположены на мембране эритроцита, а в крови циркулируют аглютинины —  альфа — α и бета — β. Аглютинин при контакте с аглютиногеном приводит к гемолизу, поэтому возможны следующие комбинации:

• только αβ — I группа крови
• A + β — II группа крови
• B + α — III группа крови
• A + B — IV группа крови

Варианты Aα и Bβ — невозможны.

Система Rh (резус-система)

Резус фактор — это сложная система, включающая более 40 антигенов на поверхности оболочки эритроцита, обозначаемых цифрами, буквами и символами. Чаще встречаются резус-антигены типа D (85 %), С (70 %), Е (30 %), е (80 %), они же обладают наиболее выраженной антигенностью — способностью стимулировать иммунную систему к синтезу антител. Система резус не имеет в норме одноимённых аглютининов (в плазме крови), но они могут появиться, если человеку с резус-отрицательной кровью перелить резус-положительную кровь.

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – произойдет гемолиз.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных — несовместимость  группы крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных — по системе АВ0, казуистично — по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов, абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки — роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но последующие чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного:

• желтушность кожи
• анемия, бледность кожи и слизистых
• увеличение печени и селезенки
• нарушения дыхания
• отек всего тела
• возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Методы диагностики глаукомы

В последнее время для выявления глаукомы чаще используют методы оптической когерентной томографии, сканирующей лазерной поляриметрии и конфокальной лазерной офтальмоскопии. Эти методы автоматизированы и, следовательно, дают достоверные и точные результаты.

Глазная гипертензия также может быть выявлена с помощью проверки толщины роговицы. Она напрямую связана с точностью показаний давления, получаемых при тонометрии. Аномальная толщина роговицы может повлиять на результаты исследования. Если толщину роговицы не учитывать, то можно ошибочно диагностировать глаукому у того пациента, у которого ее нет.

Периметрия

С помощью периметрии проверяют периферическое зрение. Свет перемещается из зоны периферического зрение в зону тоннельного зрения, а пациент должен сказать врачу, когда он заметит источник света (голова пациента неподвижна).

Во время гониоскопии проверяется угол передней камеры глаза (находится между радужной оболочкой и роговицей). Положение угла и то, является ли он открытым или закрытым, может указывать на наличие глаукомы.

В каждом из этих тестов требуются определенные инструменты. Чтобы проверить глазное давление, необходимо иметь несколько инструментов. Иногда используются различные тонометры. Некоторые из этих инструментов позволяют зафиксировать различия между полушариями мозга.