Дыхательный тест на хеликобактер
Содержание:
- Дыхательный тест на Хеликобактер пилори
- Как подготовиться?
- Суть методик
- Результаты анализа и показатели нормы
- Быстрый уреазный тест
- Принцип дыхательного теста
- Общие сведения о Helicobacter pylori
- Особенности быстрого уреазного теста
- Преимущества [ править | править код ]
- Виды и суть дыхательного теста
- Расшифровка результатов
Дыхательный тест на Хеликобактер пилори
Метод исследования относится к неинвазивным. Он представлен в нескольких вариациях.
В основе UBT лежит употребление внутрь мочевины, меченой изотопом 13С. Уреаза бактерий разлагает мочевину с радионуклидом до аммиака и углекислого газа, который сохраняет меченый углерод 13С. Далее углекислый газ всасывается в желудке, доставляется в легкие и покидает организм с выдыхаемым воздухом. Пациент выдыхает в специальный контейнер, который исследуется с помощью газового спектрометра или лазерного прибора.
В основе дыхательного ХЕЛИК-теста лежит измерение исходного уровня аммиака в выдыхаемом воздухе, за которым следует употребление карбамида (мочевины) внутрь и повторное исследование уровня аммиака.
Подготовка
Перед исследованием следует соблюдать рекомендации:
- методика проводится на голодный желудок, последний прием пищи не позднее 8 часов назад, последний прием жидкости за час до процедуры;
- за две недели до тестирования отменяется употребление антибиотиков, ингибиторов протонной помпы (Омепразол, Пантопрозол) и блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов (Ранитидин);
- за двое суток запрещен прием препаратов висмута (Де-Нол), антацидов, обезболивающих;
- необходимо ограничить прием алкоголя за несколько суток;
- следует соблюдать диетические рекомендации: отказаться от бобовых, жевательной резинки за сутки перед тестом;
- в день проведения метода нельзя курить;
- утром следует тщательно почистить зубы и прополоскать рот.
Методика проведения
13С-дыхательный тест проводится по следующей инструкции:
- пациент делает нефорсированный выдох в специальный мешок-контейнер, после чего его сразу герметично закрывают;
- далее, следует выпить раствор меченой мочевины;
- через 30 минут необходимо повторно сделать нефорсированный выдох в герметичный мешок.
Дыхательный ХЕЛИК-тест проводится с использованием индикаторной трубки или спектрометра с обработкой результатов на компьютере. В первом случае пациент дышит в индикаторную трубку, а во втором в специальный прибор.
Алгоритм выполнения исследования похож в обоих случаях:
- пациенту в рот помещается трубка, дышать нужно не в нее, а с приоткрытым ртом;
- следует тщательно следить, чтобы в трубку не попала слюна, лучше вытащить и проглотить ее вовремя;
- через шесть минуть трубка вытаскивается;
- пациенту предлагают выпить раствор карбамида (мочевины) 500 мг, растворенной в 20 мл воды;
- затем следует тщательно пополоскать ротовую полость;
- трубка повторно устанавливается в рот и в течение шести минут проводится повторное исследование.
Методика проведения дыхательного теста
Расшифровка показателей
Что это такое – положительный уреазный тест? Это когда уровень аммиака после употребления 500 мг мочевину возрастает более 4 мм, а прирост по сравнению с донагрузочным тестом составляет более 2 мм.
Преимущества
Плюсы данных исследований заключаются в следующем:
- высокая информативность и специфичность;
- неинвазивность, можно проводить пациентам, которым противопоказана гастроскопия;
- быстрое получение результата;
- можно использовать для оценки эффективности лечения;
- исследуется вся слизистая желудка, а не ее локальные области.
Недостатки
Минусы состоят в следующем:
- высокая стоимость оборудования;
- ложноположительные результаты при персистенции уреазопродуцирующих микробов во рту.
Как подготовиться?
Подготовка к дыхательному тесту на наличие бактерии хеликобактер пилори является обязательным условием. Если оно не будет выполнено пациентом, то результаты исследований будут ложными. Например, тестирование покажет отсутствие патогенной микрофлоры, и больной не пройдет медикаментозный курс лечения. А на самом деле в его организме присутствует эта бактерия, которая будет активно размножаться ввиду того, что не проводится ее эрадикация.
Для того чтобы с первого раза сдать анализ (дыхательный) на наличие бактерии хеликобактер, человек должен пройти специальную подготовку, которая предусматривает следующее:
- Если больной проходит медикаментозный курс терапии, в который включении антибиотики и антацидные средства, то не позднее, чем за 2 недели он должен прекратить их прием. К таким лекарственным средствам относятся: таблетки Нексиума, Париета, Нольпаза, Кваматела, Ранитидина. В этих медикаментах присутствуют компоненты, которые способны повлиять на результат исследований.
- Не позднее, чем за 5-ть дней до проведения тестирования, человек должен прекратить прием лекарственных средств, входящих в противовоспалительную группу препаратов. В данном случае речь идет о Ренни, Маалоксе, Алмагеле, Фосфалюгеле, Гевисконе и т. д.
- Категорически запрещается употреблять алкоголесодержащие напитки за 3 дня до тестирования.
- За сутки до проведения исследований пациент должен исключить из своего меню все продукты, которые способны усилить процесс газообразования. В данном случае речь идет о черных сортах хлеба, картофеле, бобовых и т. д. Ужин, перед тестированием, должен быть очень легким, можно от него и вовсе отказаться.
- Утром, в день проведения исследований, больной не должен завтракать, так как тест (дыхательный) может быть выполнен только натощак и не рекомендуется жевать жвачку. Также пациенту запрещается курить. В обязательном порядке проводятся гигиенические процедуры, в частности тщательно чистятся зубы и прополаскивается ротовая полость.
Суть методик
Ранее для выявления хеликобактер применялись три методики:
- Тест образца желудочной слизи при ФГДС.
- Анализ крови на выявление антител к этой бактерии.
- ПЦР анализ кала.
Первый метод и сейчас является наиболее эффективным и достоверным. Однако для его проведения требуется выполнение ФГДС, которая является достаточно неприятной и инвазивной процедурой для пациента. Второй метод также инвазивен, так как требует забора крови. Он является наименее информативным и может выполняться только в отдельных случаях по рекомендации врача. ПЦР анализ кала является достоверным в 93-95 % случаев и неинвазивным, но после перенесенного заболевания выведение хеликобактер из организма будет продолжаться, и его результаты будут еще длительное время оставаться положительными из-за отхождения ДНК уже «убитых» антибиотиками бактерий.
Не так давно появились новые неинвазивные методики для выявления хеликобактер – С-уреазный дыхательный тест и дыхательный Хелик-тест (или быстрый тест).
С-уреазный дыхательный тест
Суть этого метода диагностики хеликобактер основана на способности этой бактерии вырабатывать особый фермент (уреазу), который ускоряет гидролиз мочевины. Этот процесс сопровождается выделением паров углекислого газа и аммония. В норме такой продуцируемый бактерией фермент не присутствует в желудке.
Для выявления уреазы в желудочном соке обследуемому необходимо принять реактив в виде капсулы с 75 мг мочевины, помеченной радиоактивным или нерадиоактивным углеродом (С14 или С13). Если у человека в желудке присутствует хеликобактер, то после приема препарата он будет выдыхать пары углекислого газа и аммиака. Наличие этих веществ зафиксирует прибор (газоанализатор), и тест будет считаться положительным. У здорового человека в выдыхаемом воздухе такие пары не обнаруживаются, и тест является отрицательным.
С-уреазный дыхательный тест для выявления хеликобактер достоверен в 95-100 % случаев, это позволяет применять данную методику для обследования многих пациентов. Его результаты бывают недостоверными только при неправильной подготовке к анализу. Исследование длится не более 30-40 минут, а результаты получаются уже спустя 1-2 дня после обследования.
С-уреазный тест с С14 абсолютно безопасен для здоровья пациента и практически не имеет противопоказаний. Он может выполняться всем категориям больным, но детям, беременным и кормящим женщинам обычно рекомендуется выполнение его более щадящего аналога – С-уреазного теста с мочевиной, помеченной нерадиоактивным С13.
Дыхательный Хелик-тест
Суть этого метода выявления хеликобактер так же основана на способности бактерии выделять уреазу, но для анализа в качестве реактива применяется раствор с 0,5 г карбамида. Уреазная активность бактерии проявится гидролизом этого вещества, а результаты очень быстро считываются при помощи анализа выдыхаемого воздуха индикаторной трубкой (за 15 минут) или цифровым аппаратом (за 9 минут). При этом измерительная аппаратура фиксирует в выдыхаемом пациентом воздухе не пары меченого углеводорода (как при С-уреазном тесте), а количественное содержание паров аммиака.
- При использовании индикаторной трубки итоги обследования оцениваются по цвету индикаторной композиции и фиксируются на бланке анализа вручную.
- При применении цифрового аппарата данные сохраняются автоматически в базе прибора и на компьютере.
Для проведения Хелик-теста требуется минимальная подготовка пациента, и он, как и С-уреазный тест, не имеет никаких противопоказаний. Такая методика выявления хеликобактер обладает высокой долей достоверности и позволяет за считанные минуты выявить заражение бактерией в принципе. Этот базовый тест стоит дешевле, но он менее информативен, чем С-уреазный. Подобный анализ нередко применяется гастроэнтерологами, терапевтами, педиатрами и семейными врачами для подтверждения инфицирования хеликобактер. Достоверность Хелик-теста составляет около 75 %.
Результаты анализа и показатели нормы
Дыхательный тест может оказаться отрицательным (инфицирование отсутствует) или положительным (при имеющейся в желудке бактерии Helicobacter pylori).
Дыхательный уреазный тест с нулевым показателем считается абсолютной нормой. Получение других результатов дает сведения о нахождении микроорганизма в желудке. Показатели степени зараженности:
- 1,5 — 3,5 ед. — присутствие бактерии в небольшом количестве в неактивной фазе;
- 3,5 — 5,5 ед. — микроорганизм есть, но в маленьком количестве;
- менее 7 ед. — количество бактерий среднее, не всегда требуется лечение;
- 7 — 15 ед. — микроорганизмов много, активность бактерий высокая;
- до 70 ед. — высокое содержание микроорганизмов, требуется лечение.
Результаты быстрого уреазного тестирования оценивают по изменению цвета окрашиваемого материала. Неизмененный в течение суток цвет материала свидетельствует об отсутствии бактерии Helicobacter pylori. Если за 24 часа цвет становится малиновым, значит, микроорганизмы присутствуют в незначительном количестве.
Если цвет изменяется в течение 2-3 часов, хеликобактер имеется в умеренном количестве, требуется назначать лечение. Изменение цвета индикатора в течение 1 часа свидетельствует о большом количестве микроорганизмов. Требуется срочно приступать к лечению.
При исследовании по методу 13С-уреазного теста результаты оценивают с помощью масс-спектрометра. Показатель углекислого газа выдыхаемом воздухе менее 1% соответствует отрицательному результату.
О степени зараженности свидетельствуют следующие показатели:
- до 3,5% — легкая;
- менее 6,5% — средняя;
- 6,5 — 9,5% — выраженная (нужно следить за состоянием пациента);
- свыше 9,5% — сильно выраженная (необходимо лечение).
С помощью применения тестов удается не только выявить бактерии Хеликобактер Пилори, но и определить степень заражения микроорганизмами, активность протекающего в пищеварительном тракте процесса.
Быстрый уреазный тест
Во время гастроскопии эндоскопистом проводится биопсия слизистой желудка в области пилорического отдела и измененных участков. Для выявления в кусочке ткани желудка уреазы необходимо поместить материал в специальную среду, которая содержит мочевину и индикатор. При наличии хеликобактерного фермента мочевина расщепится на углекислый газ и ионы аммония. рН среды отклонится в щелочную сторону и индикатор отобразит это сменой цвета.
Подготовка
За две недели перед проведением диагностики следует отказаться от приема препаратов висмута (Де-Нол), ингибиторов протонной помпы (Омепразол, Пантопрозол, Омез, Квамател), антибиотиков.
Накануне исследования легких ужин за 8 часов до проведения гастроскопии. Воду не пить после полуночи.
Методика проведения
Быстрый уреазный тест или «CLO-тест», «Де-Нол-тест», «ХЕЛПИЛ-тест» проводится по следующему алгоритму:
- с помощью щипцов на конце эндоскопа проводится биопсия ткани – отщипывание кусочка с области дна и тела желудка;
- материал помещается в среду, содержащую мочевину и индикатор феноловый красный;
- положительный результат фиксируется в случае изменения цвета индикатора с желтого на ярко-красный.
Расшифровка показателей
Результат ставится на основании интенсивности окраски индикатора. Эндоскопист оценивает окраску плюсами.
+ — 1 степени уреазной активности, низкий уровень Хеликобактер, окраска появляется в течение суток.
++ — 2 степень уреазной активности, умеренный уровень заражения бактерией, индикатор приобретает красный цвет в течение двух часов.
+++ — 3 степень уреазной активности, значительный уровень инфицирования, ярко-красный цвет индикатора в течение часа от проведения исследования.
Что это такое – отрицательный уреазный тест? Это когда индикатор не меняет свою окраску в течение 24 часов с момента начала исследования.
Преимущества
Быстрый уреазный тест с биоптатом желудка имеет следующие преимущества:
- быстрое проведение диагностики – в среднем около 30 минут;
- невысокая стоимость;
- не требует специфического дорогостоящего оборудования.
Недостатки
У быстрого уреазного теста есть несколько существенных недостатков, которые не позволяют считать данный метод – «золотым стандартом»:
- при недостаточном обсеменении бактериями биоптата на изменение окраски индикатора может понадобиться около двух часов;
- проведение метода дает информацию о состоянии слизистой желудка только в одном месте;
- материал, полученный во время эндоскопии, не подлежит дальнейшему гистологическому исследованию, за счет этого нет возможности сопоставить результат уреазного теста с микроскопическими изменениями слизистой;
- высокий уровень ложноположительных результатов за счет персистенции грамотрицательной флоры в желудке, которая также может вырабатывать уреазу в небольших количествах;
- в случае наличия язвенного кровотечения в желудке метод неинформативен.
Наука не стоит на месте, каждый день изобретаются более совершенные методы диагностики. Идеального исследования с оптимальным соотношением цены и качества нет. Необходимо выбрать для себя удобный способ обследоваться. При этом необходимо опираться на мнение специалиста, так как данная статья не является руководством к действию.
На видео представлена информация по диагностике заболеваний желудка.
https://youtube.com/watch?v=Q8-5z2u-CxY
В ходе обследования может быть использован следующий биоматериал:
- биоптат любого отдела желудка;
- биоптат луковицы двенадцатиперстной кишки.
Размер биоптата должен быть не менее 2 мм.
Чувствительность тест-системы ХЕЛПИЛ составляет 97%, специфичность 98%.
Тест-система полностью готова к применению, не требует приготовления или инкубирования.
После обследования биоптат пригоден для других исследований, например, гистологического или бактериологического, как рекомендовано «Стандартами диагностики и лечения органов пищеварения».
Принцип дыхательного теста
Наиболее популярным методом диагностики хеликобактера в современной медицине является дыхательный тест. В основе работы уреазного хелик-теста лежит биохимия гидролиза мочевины. Хеликобактер в процессе жизнедеятельности продуцирует уреазу. Этот фермент ускоряет переработку мочевины в аммиак и CO2. Уреаза помогает бактерии жить и размножаться в агрессивной среде желудка.
Пациенту дают выпить раствор карбамида (мочевины), в результате гидролиза которого вырабатывается газ, поступающий в ротовую полость. Уровень попадающего в тест-трубку газа до и после выпитой мочевины позволяет определить наличие бактерии.
Тест показывает присутствие helicobacter pylori и уровень обсеменения ею слизистой желудка. При повторных тестах оценивается динамика протекания заболевания.
Общие сведения о Helicobacter pylori
На присутствие хеликобакте в организме пищеварительная система реагирует рядом опасных заболеваний, причиной которых становится токсическое воздействие продуктов жизнедеятельности бактерии. Колонизирующий нижний отдел желудка микроорганизм способен существовать в условиях высокого уровня кислотности среды, быстро мигрируя благодаря спиралевидным жгутикам. Способность к выработке уреазы (защитного фермента) обеспечивает Helicobacter pylori защиту от желудочного сока, основным методом инфицирования считается контактно-бытовой путь.
Инфицирование организма человека хеликобактер пилори долгое время может оставаться незамеченным. Внедряясь в стенки желудка, микроорганизм способствует активному синтезу соляной кислоты, гастрина, пепсина, что оборачивается растворением клеток слизистой оболочки с появлением характерных симптомов хеликобактериоза:
- изжоги, сопровождаемой отрыжкой с кислотным содержимым;
- болевым симптомом в эпигастральной зоне во время и после приема пищи;
- признаками нарушенного пищеварения – метеоризмом, вздутием живота;
- быстрым насыщением либо постоянным чувством голода;
- дисбактериозом, аллергией, грибковыми поражениями.
Интересные факты: спиралевидную бактерию, отнесенную к роду грамотрицательных микроорганизмов, случайно удалось обнаружить немецким ученым в 1875 г. К концу прошлого века с похожим организмом столкнулся российский профессор, а впервые культивировать бактерию посчастливилось австралийским патологоанатомам. После этого медицинскому сообществу пришлось признать Helicobacter pylori виновницей желудочных патологий.
Особенности быстрого уреазного теста
Helpil test, как по другому называют быстрый уреазный тест, проводиться во время процедуры ЭГДС, ФГДС. Во время гастроскопии проводится биопсия пилорического отдела желудка (нижний отдел). Кусочек ткани помещают в емкость с мочевиной и красным феноловым индикатором. Если хеликобактер пилори присутствует, то это отобразиться в виде расщепления мочевины в аммиак и диоксид углерода. Расщепление мочевины изменит кислотно-щелочной баланс, что в свою очередь, изменит цвет индикатора с желтого на красный. Насколько быстро индикатор сменит цвет, можно сказать о количестве бактерий Hp и их активности. Если мочевина не была расщеплена, то результат является отрицательным, это означает, что бактерии в организме не присутствуют.
Подготовка
При подготовке к быстрому тесту следует выполнять все предписания по подготовке организма к ФГС. Выполнение всех правил перед подготовкой влияет на успешность процедуры.
Процесс проведения
Во время проведения ФГДС с уреазным тестом, врач с помощью щипцов на конце эндоскопа проводит биопсию пилорического отдела желудка. Ткань помещают в емкость с мочевиной и индикатором. В случае смены желтого цвета индикатора на красный, можно сказать, что результат положительный.
Результаты проведения
В случае положительного результата по интенсивности окраса можно определить уреазную активность:
«+» — Первая степень – Уровень Хеликобактер слабоположительный, окрас проявляется в течение суток;
«++» — Вторая степень – Уровень Хеликобактер положительный, окрас проявляется в течение 2-2,5 часов;
«+++» — Третья степень — уровень Хелокобактер резко положительный, окрас проявляется в течение часа.
Если за сутки и более окрас не изменился, это значит, что результат анализа отрицательный.
Плюсы хелпил теста
К положительным сторонам быстрого уреазного теста можно отнести:
- Процедура считается недорогой;
- Положительный результат можно получить в течение дня;
- Процедура является распространенной, и не требует специального оборудования.
Минусы хелпил теста
Несмотря на высокую информативность, экспресс диагностика хеликобактериоза по уреазной активности биопата имеет небольшие недостатки:
- Если заражение бактериями незначительно, то результат придется ждать около суток;
- Быстрый уреазный тест дает представление о состоянии желудка только в месте проведения биопсии;
- Материал, взятый на биопсию не может использоваться в других целях или повторно:
- Результат может быть неточным, если в желудке присутствует кровь;
- Результат можно быть ложноположительным, если в организме присутствуют Helicobacter heilmanii, т.е. схожие с Helicobacter pylori бактерии.
- Результат может быть ложноотрицательным, если в организме присутствует небольшое количество Helicobacter pylori;
- Результат может быть неинформативным, если не соблюдались все условия при подготовке к процедуре;
- Результат может быть ложноотрицательным, если перед процедурой были употреблены антисекреторные лекарственные препараты.
Преимущества [ править | править код ]
Метод позволяет получить заключение быстро — от нескольких минут до нескольких часов. Его использование не предполагает наличие специального лабораторного оборудования или подготовленных специалистов и выполняется непосредственно эндоскопистом. Дешев при массовом и индивидуальном применении. В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов.
Существует доказательства того, что H.pylori движется ближе к центру желудка у больных, находящихся на лечении с ингибиторами протонного насоса, и, таким образом, образцы данных пациентов должны получать из дна и тела желудка.
Виды и суть дыхательного теста
Как уже отмечалось выше, дыхательный тест является абсолютно безопасным. Его широко применяют гастроэнтерологи и терапевты, чтобы провести первичную диагностику, а также для контроля над тем, насколько действенным является лечение.
Суть дыхательного теста состоит в выявлении продуктов жизнедеятельности Helicobacter Pylori в выдыхаемом пациентами воздухе. Существует два основных метода дыхательного теста. Они отличаются по компоненту, который используется для реакции.
С-уреазный дыхательный тест
Суть данного метода исследования базируется на способности бактерии хеликобактер вырабатывать особый фермент — уреазу, ускоряющую гидролиз мочевины. Этот процесс сопровождает выработка углекислого газа и аммония. У людей, которые не инфицированы Helicobacter Pylori, уреаза в желудке отсутствует.
Для того, чтобы выявить наличие уреазы, обследуемый принимает особый реактив. Это капсула, в которой содержится 75 мг мочевины, помеченной либо радиоактивным, либо нерадиоактивным углеродом (С14 или С13). В том случае, если в организме пациента присутствует хеликобактер, после приема реактива начнет происходить гидролиз или разложение мочевины, и через полчаса пациент начинает выдыхать пары аммиака и углекислого газа, наличие которых зафиксирует особый прибор. В этом случае тест является положительным. Если же бактерия в организме отсутствует, то аммиачные пары и пары углекислого газа в выдыхаемом воздухе будут отсутствовать — тест будет отрицательным.
Продолжительность проведения теста, как правило, не превышает сорока минут. При этом, при условии тщательной подготовки к анализу, его достоверность составляет более 95%. Примечательно, что тест с использованием радиоактивного углерода С14 так же безопасен, как и исследование с применением нерадиоактивного С13.
Дыхательный Хелик-тест
Этот способ выявления хеликобактер также базируется на способности этой бактерии вырабатывать уреазу. От С-уреазного теста данный метод отличается тем, что используется раствор, содержащий 0,5 г карбамида. Бактерия способна спровоцировать гидролиз этого вещества, вследствие чего в выдыхаемом пациентом воздухе повыситься количественное содержание паров аммиака.
Фиксируется их наличие с помощью особой индикаторной трубки (в этом случае меняется цвет индикатора) либо же цифровым аппаратом.
При этом следует учитывать, что Хелик-тест является менее дорогостоящим, но в то же время менее информативным, чем С-уреазный. Его достоверность не превышает 75%.
Расшифровка результатов
После проведения диагностики лаборанты анализируют полученные данные. Пациент получит выписку, в которой будут указаны результаты проб. Расшифровать результат сможет гастроэнтеролог, терапевт. При необходимости сразу же назначат лечение.
Расшифровка результатов включает в себя сравнительный анализ нескольких проб выдыхаемого пациентом воздуха. Разница между ними учитывается в заключении к анализу. Норма менее 0,3 промилле говорит об отсутствии бактерий, и о том, что человек здоров.
Степень инфицированности по уреазному тесту:
- От 1 до 3,4 – легкая;
- От 3,5 до 6,4 – средняя;
- От 6,5 до 9,4 – тяжелая;
- Свыше 9,5 – крайне тяжелая.
Хелик-тест не имеет цифровых показателей. Результат оценивается по шкале через 30 минут после взятия проб. Он укажет, есть ли в желудке инфекция или её нет.
Положительный результат
Для проведения и оценки результата можно обратиться к терапевту, педиатру или гастроэнтерологу в поликлинике. При положительном результате врач назначает лечение.
При отсутствии неприятных симптомов терапия включает в себя антибактериальные препараты. Они избавят от дисбактериоза, восстановят пищеварительный процесс и микрофлору в кишечнике. Нельзя применять народные методы лечения. Они приводят к осложнениям, ухудшают состояние пациента.
Для лечения хеликобактер пилори применяют:
- Антибиотики: Кларитромицин, Азитромицин, Амоксиклав, Флемоксин Солютаб.
- Де-Нол на основе трикалия дицитрата.
- Блокаторы (ингибиторы): Омепразол, Рабепразол, Пантопразол.
Обязательно в комплексном лечении присутствует корректировка питания. Чтобы избежать повторного заражения, придерживаются профилактических мер, таких как личная гигиена, мытье рук после посещения общественных мест.